Human parainfluenza virus surveillance in pediatric patients with lower respiratory tract infections: a special view of parainfluenza type 4 / Vigilância dos vírus parainfluenza humanos em pacientes pediátricos com infecções do trato respiratório inferior: uma visão especial do parainfluenza tipo 4

Abstract Objective: Characterize the role of human parainfluenza virus and its clinical features in Brazilian children under 2 years of age presenting with acute lower respiratory tract infections. Methods: Real-time assays were used to identify strains of human parainfluenza virus and other common respiratory viruses in nasopharyngeal aspirates. One thousand and two children presenting with acute lower respiratory tract illnesses were enrolled from February 2008 to August 2010. Results: One hundred and four (10.4%) patients were human parainfluenza virus positive, of whom 60 (57.7%) were positive for human parainfluenza virus-3, 30 (28.8%) for human parainfluenza virus-4, 12 (11.5%) for human parainfluenza virus-1, and two (1.9%) for human parainfluenza virus-2. Seven (6.7%) patients had more than one strain of human parainfluenza virus detected. The most frequent symptoms were tachypnea and cough, similar to other viral respiratory infections. Clinical manifestations did not differ significantly between human parainfluenza virus-1, -2, -3, and -4 infections. Human parainfluenza virus-1, -3, and -4 were present in the population studied throughout the three years of surveillance, with human parainfluenza virus-3 being the predominant type identified in the first two years. Conclusion: Human parainfluenza viruses contribute substantially to pediatric acute respiratory illness (ARI) in Brazil, with nearly 30% of this contribution attributable to human parainfluenza virus-4.

Resumo Objetivo: Caracterizar o papel do VPH-4 e suas características clínicas em crianças brasileiras com menos de dois anos de idade com infecções agudas do trato respiratório inferior. Métodos: Ensaios em tempo real foram utilizados para identificar tipos de VPH e outros vírus respiratórios comuns em aspirados nasofaríngeos. Mil e duas crianças com doença aguda do trato respiratório inferior foram inscritas para participar de fevereiro de 2008 a agosto de 2010. Resultados: 104 (10,4%) pacientes eram VPH positivos, dos quais 60 (57,7%) eram positivos para VPH-3, 30 (28,8%) para VPH-4, 12 (11,5%) para VPH-1 e dois (1,9%) para VPH-2. Sete (6,7%) pacientes apresentaram mais de um tipo de VPH detectado. Os sintomas mais frequentes foram tosse e taquipneia, semelhantes a outras infecções respiratórias virais. As manifestações clínicas não diferiram de forma significativa entre as infecções por VPH-1, -2, -3 e -4. Os VPH-1, -3 e -4 estavam presentes na população estudada ao longo dos três anos de vigilância, e o VPH-3 foi o tipo predominante identificado nos primeiros dois anos. Conclusão: Os VPHs contribuem substancialmente para a DRA pediátrica no Brasil com quase 30% dessa contribuição atribuível ao VPH-4.

Clinical and epidemiological aspects related to the detection of adenovirus or respiratory syncytial virus in infants hospitalized for acute lower respiratory tract infection / Aspectos clínicos e epidemiológicos relacionados à detecção de adenovírus ou vírus sincicial respiratório em crianças hospitalizadas por doença aguda do trato respiratório inferior

OBJECTIVE: To characterize and compare clinical, epidemiological, and laboratory aspects ofinfants with acute lower respiratory infection (ALRI) associated with the detection of adenovirus(ADV) or respiratory syncytial virus (RSV). METHODS: A preliminary respiratory infection surveillance study collected samples of nasopharyngeal aspirate (NPA) for viral research, linked to the completion of a standard protocol, from children younger than two years admitted to a university hospital with ALRI, between March of 2008 and August of 2011. Polymerase chain reaction (PCR) was used for eight viruses: ADV, RSV, metapneumovirus, Parainfluenza 1, 2, and 3, and Influenza A and B. Cases with NPA collectedduring the first 24 hours of admission, negative results of blood culture, and exclusive detection of ADV (Gadv group) or RSV (Grsv group) were selected for comparisons. RESULTS: The preliminary study included collection of 1,121 samples of NPA, 813 collected in thefirst 24 hours of admission, of which 50.3% were positive for at least one virus; RSV was identifiedin 27.3% of cases surveyed, and ADV was identified in 15.8%. Among the aspects analyzed inthe Gadv (n = 58) and Grsv (n = 134) groups, the following are noteworthy: the higher meanage, more frequent prescription of antibiotics, and the highest median of total white blood cellcount and C-reactive protein values in Gadv. CONCLUSIONS: PCR can detect persistent/latent forms of ADV, an aspect to be considered wheninterpreting results. Additional studies with quantitative diagnostic techniques could elucidatethe importance of the high frequency observed. .

OBJETIVO: Caracterizar e comparar aspectos clínicos, epidemiológicos e laboratoriais delactentes com evidências de infecção aguda do trato respiratório inferior (IATRI) associada à detecção do adenovírus (ADV) ou do vírus sincicial respiratório (VSR). MÉTODOS: Um estudo preliminar de vigilância de infecções respiratórias desenvolveu coleta de aspirado nasofaríngeo (ANF) para pesquisa viral, vinculada ao preenchimento de protocolo padrão, de menores de dois anos internados com quadro de IATRI em hospital universitário, entre março de 2008 e agosto de 2011. Utilizou-se técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) para oito vírus: ADV, VSR, metapneumovírus, parainfluenza 1, 2 e 3 e influenza A e B. Foram selecionados para comparações os casos com ANF coletado nas primeiras 24 horas da admissão, resultado de hemocultura negativo e detecção exclusiva de ADV (grupo Gadv) ou VSR (grupo Gvsr). RESULTADOS: O estudo preliminar incluiu coleta de 1.121 amostras de ANF, sendo 813 coletadas nas primeiras 24 h da admissão, das quais 50,3% foram positivas para ao menos um dos vírus, com VSR em primeiro lugar, em 27,3%, e ADV em segundo, em 15,8% dos casos pesquisados. Dentre os aspectos analisados nos grupos Gadv (n = 58) e Gvsr (n = 134), destacaram-se a média da idade mais elevada, maior frequência da prescrição de antibióticos e medianas mais elevadas para contagem total de leucócitos e valores da proteína C-reativa no Gadv. CONCLUSÕES: A PCR utilizada pode detectar formas persistentes/latentes de ADV, aspecto aser considerado ao interpretar os resultados. Estudos complementares com técnicas diagnósticas quantitativas, por exemplo, poderiam evidenciar a importância da elevada frequência verificada. .

Characterization of rabies virus isolated from a colony of Eptesicus furinalis bats in Brazil / Caracterização do vírus da raiva isolado de uma colônia de morcegos Eptesicus furinalis, do Brasil

Some bat species have adapted to the expanding human population by acquiring the ability to roost in urban buildings, increasing the exposure risk for people and domestic animals, and consequently, the likelihood of transmitting rabies. Three dead bats were found in the yard of a house in an urban area of Jundiaí city in the state of São Paulo in southeast Brazil. Two of the three bats tested positive for rabies, using Fluorescent Antibody and Mouse Inoculation techniques. A large colony of Eptesicus furinalis was found in the house's attic, and of the 119 bats captured, four more tested positive for rabies. The objectives of this study were to report the rabies diagnosis, characterize the isolated virus antigenically and genetically, and study the epidemiology of the colony.

Algumas espécies de morcegos têm se adaptado ao uso de abrigos em construções urbanas, aumentando a possibilidade de contato desses morcegos com pessoas e animais domésticos e conseqüentemente, o potencial risco de transmissão de raiva. Três morcegos foram encontrados no jardim de uma casa na área urbana da cidade de Jundiaí, Estado de São Paulo, Sudeste do Brasil, dois deles foram positivos para raiva pelas técnicas de imunofluorescência e inoculação em camundongos. Uma grande colônia de E. furinalis foi identificada, vivendo no sótão da casa e 119 morcegos foram encaminhados para diagnóstico de raiva, com mais quatro morcegos positivos. O objetivo desse estudo é apresentar a caracterização genética e antigênica do vírus da raiva isolado desses morcegos e o estudo epidemiológico da colônia.

Incidence and clinical characteristics of the infection by the Respiratory Syncytial Virus in children admitted in Santa Casa de São Paulo Hospital

The purpose of this study was to identify the rate of infections due to RSV and other viruses in children. In addition we have analyzed demographic data and clinical characteristics of the RSV-positive patients comparing with patients infected by other respiratory viruses. We also described the seasonality of the RSV occurrence in a hospital in São Paulo. Children below 5 years old admitted in Santa Casa de São Paulo Hospital between February 2005 and September 2006 due to acute respiratory infections (ARI) were included. A nasopharyngeal specimens were obtained with sterile No. 5 French feeding catheters as soon as possible (usually within 24 h). Specimens were kept refrigerated at 4ºC and transported to Adolfo Lutz Institute, where the indirect immunofluorescent assay was performed. Virus identified by these assay included RSV, Adenovirus, Influenza A and B virus and Parainfluenza 1, 2, and 3. Clinical data from each group was compared. Four hundred and fifty five cases were included in the study, with 30 percent positive for some type of virus. Viruses that were identified included Respiratory Syncytial Virus (73.03 percent), Influenza (8.42 percent), Parainfluenza (8.42 percent) and Adenovirus (3.37 percent). We divided the subjects in 3 groups: Group 1 RSV-Positive, Group 2 Other Positive Viruses and Group 3 Negative for Respiratory Virus. Mean age (months) was of 7.5 for RSV-positive children, 7.6 for other viruses, and 8 for negative for respiratory virus. The RSV-Positive Group was significantly younger than the Group Negative for Respiratory Virus (p<0.05). Signs of UAI were more present in the Positive RSV Group (p<0.05). General mortality was of 2.41 percent. There was a higher incidence of RSV between the months of March and August in the two years of the study. Our study indicates RSV as the most prevalent viral agent in children admitted due to (ARI), especially in infants below 3 months old. We have also found that infections...

Vigilância de oito vírus respiratórios em amostras clínicas de pacientes pediátricos no sudeste do Brasil / Surveillance of eight respiratory viruses in clinical samples of pediatric patients in Southeast Brazil

OBJETIVO: Detecção de oito vírus respiratórios mais comuns: vírus respiratório sincicial humano (VRSH), vírus influenza tipo A e B (IA e IB), vírus da parainfluenza 1, 2 e 3 (VPIH1, 2 e 3), adenovírus (Ad) e metapneumovírus humano (MPVH), a fim de estabelecer a etiologia das infecções respiratórias agudas (IRA) e a epidemiologia desses vírus em crianças pequenas atendidas no Hospital Universitário da Universidade de São Paulo, em São Paulo, Brasil, durante o ano de 2003. MÉTODOS: A vigilância epidemiológica foi realizada em todas as crianças menores de 5 anos hospitalizadas por causa de doenças do trato respiratório inferior (DTRI) entre 1º de janeiro de 2003 e 20 de dezembro de 2003, no hospital universitário. Amostras coletadas de nasofaringe foram analisadas quanto à presença de vírus respiratórios através da reação em cadeia da polimerase e detectadas pelo programa GeneScan. RESULTADOS: Das 336 amostras coletadas, 187 (55,6 por cento) foram positivas para pelo menos um dos vírus respiratórios estudados. De todas as crianças, o VRSH foi identificado em 24,1 por cento, o MPVH em 17,8 por cento, o VPIH3 em 8,3 por cento, o Ad em 6,8 por cento, o IA em 5 por cento, o VPIH1 em 0,6 por cento, sendo que nenhum vírus foi detectado em 44,1 por cento. Infecções virais duplas foram detectadas em 7,1 por cento de todas as amostras (12,8 por cento das amostras positivas). O VPIH2 e o IB não foram detectados no presente estudo. CONCLUSÕES: Este estudo confirma que as crianças menores de 5 anos, e especialmente aquelas menores de 1 ano, apresentam uma alta taxa de hospitalização devido aos seguintes vírus: VRSH, MPVH, VPIH, influenza e adenovírus. Foi possível determinar a etiologia e epidemiologia da maioria das IRAs e traçar o perfil de sazonalidade dos vírus respiratórios mais comuns entre as crianças pequenas.

OBJECTIVE: Detection of the eight most common respiratory viruses: Human respiratory syncytial virus (HRSV), influenza virus A and B (IA and IB), parainfluenza viruses 1, 2 and 3 (HPIV1, 2 and 3), adenovirus (Ad) and human metapneumovirus (HMPV), in order to establish the etiology of acute respiratory infections (ARIs) and the epidemiology of these viruses in young children seen at Hospital Universitário, Universidade de São Paulo, in São Paulo, Brazil, during 2003. METHODS: The epidemiological surveillance was conducted in all children younger than 5 years hospitalized at the Hospital for lower respiratory tract infections (LRTI) from January 1, 2003 to December 30, 2003. Nasal and throat samples were scanned for respiratory viruses by polymerase chain reaction and detected by the GeneScan assay. RESULTS: Of 336 samples collected from 336 patients, 187 (55.6 percent) were positive for at least one of the respiratory viruses studied. Of all the children, HRSV was identified in 24.1 percent, HMPV in 17.8 percent, HPIV3 in 8.3 percent, Ad in 6.8 percent, IA in 5 percent, HPIV1 in 0.6 percent, but no virus could be detected in 44.1 percent. Dual virus infections were detected in 7.1 percent of all samples (12.8 percent of positive samples). HPIV2 and IB were not detected in the present study. CONCLUSIONS: This study confirms that children younger than 5 years and particularly younger than 1 year have a high hospitalization rate due to HRSV, HMPV, HPIV, influenza and adenovirus. We were able to determine the etiology and epidemiology of most ARIs and trace the seasonal profile of the commonest respiratory viruses among young children.

Lower respiratory tract infection caused by respiratory syncytial virus in infants: the role played by specific antibodies

INTRODUCTION: Respiratory syncytial virus (RSV) is a major etiological agent of lower respiratory tract infection in infants. Genotypes of this virus and the role of the infants' serum antibodies have yet to be fully clarified. This knowledge is important for the development of effective therapeutic and prophylactic measures. OBJECTIVES: To evaluate the types and genotypes of RSV causing respiratory tract infection in infants, to analyze the association of subtype-specific serum antibodies with the occurrence of infection and to evaluate the presence of subtype-specific antibodies in the infants' mothers and their association with the profile of the childrens' serum antibodies. METHODS: This was a prospective study on infants hospitalized with respiratory infection. Nasopharyngeal secretions were collected for viral investigation using indirect immunofluorescence and viral culture and blood was collected to test for antibodies using the Luminex Multiplex system. RESULTS: 192 infants were evaluated, with 60.9 percent having RSV (73.5 percent- A and 20.5 percent B). Six genotypes of the virus were identified: A5, A2, B3, B5, A7 and B4. The seroprevalence of the subtype-specific serum antibodies was high. The presence and levels of subtype-specific antibodies were similar, irrespective of the presence of infection or the viral type or genotype. The mothers' antibody profiles were similar to their infants'. CONCLUSIONS: Although the prevalence of subtype-specific antibodies was elevated, these antibodies did not provide protection independently of virus type/genotype. The similarity in the profiles of subtype-specific antibodies presented by the mothers and their children was consistent with transplacental passage.

INTRODUÇÃO: O vírus sincicial respiratório é um dos principais agentes etiológicos das infecções do aparelho respiratório inferior em lactentes. Os genótipos deste vírus e o papel dos anticorpos séricos ainda não estão esclarecidos. Este conhecimento é importante para o desenvolvimento de medidas terapêuticas e profiláticas. OBJETIVOS: Avaliar: os tipos e genótipos do vírus sincicial que causam infecção respiratória em lactentes e a associação dos anticorpos séricos subtipo-específicos com a ocorrência de infecção; a presença de anticorpos subtipo-específicos nas mães e sua associação com o perfil de anticorpos da criança. MÉTODOS: Estudo prospectivo incluindo lactentes hospitalizados com infecção respiratória. Foi coletada secreção de nasofaringe para investigação viral usando imunofluorescência indireta e cultivo viral. Foi coletado sangue para pesquisa de anticorpos usando o sistema Luminex Multiplex. RESULTADOS: Avaliados 192 lactentes: 60,9 por cento com vírus sincicial (73,5 por cento - A e 20,5 por cento - B). Seis genótipos de vírus sincicial respiratório foram identificados: A5,A2,B3,B5,A7 e B4. A soroprevalência dos anticorpos subtipos-específicos foi alta. A presença e o nível de anticorpos subtipos-específicos foram semelhantes, independentemente da presença de infecção, tipo e genótipo do vírus. As mães e as crianças apresentaram perfis semelhantes de anticorpos. CONCLUSÕES: A prevalência dos anticorpos subtipos-específicos foi elevada mas estes anticorpos não conferiram proteção, independentemente do tipo/genótipo do vírus. A semelhança dos perfis de anticorpos das mães e das crianças foi compatível com transmissão transplacentária.

Prevalence of Clostridium spp. and Clostridium difficile in children with acute diarrhea in São Paulo city, Brazil

Species of Clostridium are widely distributed in the environment, inhabiting both human and animal gastrointestinal tracts. Clostridium difficile is an important pathogen associated with outbreaks of pseudomembranous colitis and other intestinal disorders, such as diarrhea. In this study, the prevalence of Clostridium spp. and C. difficile, from hospitalized children with acute diarrhea, was examined. These children were admitted to 3 different hospitals for over 12 months. Eighteen (20 percent) and 19 (21 percent) stool specimens from children with (90) and without (91) diarrhea respectively, were positive to clostridia. Only 10 C. difficile strains were detected in 5.5 percent of the stool samples of children with diarrhea. None healthy children (without diarrhea) harbored C. difficile. From these 10 C. difficile, 9 were considered as toxigenic and genotyped as tcdA+/tcdB+ or tcdA-/tcdB+, and 1 strain as nontoxigenic (tcdA-/tdcB-). They were detected by the citotoxicity on VERO cells and by the multiplex-polymerase chain reaction. Thirty clinical fecal extracts produced minor alterations on VERO cells. The presence of C. difficile as a probable agent of acute diarrhea is suggested in several countries, but in this study, the presence of these organisms was not significant. More studies will be necessary to evaluate the role of clostridia or C. difficile in diarrhoeal processes in children

Rash after measles vaccination: laboratory analysis of cases reported in Säo Paulo, Brazil

OBJETIVO: O diagnóstico diferencial de doenças exantemáticas causadas por vírus é geralmente difícil, e equívocos näo säo raros, especialmente depois da introduçäo da vacina contra o sarampo e a rubéola. Um estudo laboratorial foi conduzido com o objetivo de estabelecer o diagnóstico etiológico de casos de exantema em crianças que receberam a vacina contra o sarampo. MÉTODOS: Soros de casos de exantema em crianças que receberam vacina contra o sarampo, em 1999, foram analisados para anticorpos IgM contra os vírus do sarampo, da rubéola e do parvovírus humano B19 (HPV B19), por técnicas comerciais de Elisa, e o herpes vírus humano tipo 6 (HHV 6), por técnica comercial de imunofluorecência. A viremia para cada um desses vírus foi testada pela reaçäo em cadeia da polimerase (PCR). RESULTADOS: Foram notificados, em 1999, 17 casos de crianças com exantema pós-vacinal. A idade das crianças era de nove a 12 meses (mediana, dez meses). Uma amostra de sangue colhida para investigaçäo laboratorial foi obtida para cada criança. O tempo decorrido entre a aplicaçäo da vacina e o aparecimento do exantema variou de um a 60 dias. Os resultados da sorologia das 17 crianças sugeriram o seguinte diagnóstico etiológico para o exantema: 17,6por cento (três em 17) infecçäo pelo HPV B19; 76,5por cento (13 em 17) infecçäo pelo HHV 6; 5,9por cento (um em 17) exantema originado pela vacina do sarampo. CONCLUSAO: Os resultados indicaram que a infecçäo pelo HPV B19 ou pelo HHV 6 pode ser diagnosticada como sarampo de origem vacinal. Portanto, é fundamental incluir esses vírus no diagnóstico laboratorial para corretamente apontar a etiologia das doenças exantemáticas, evitando, assim, atribuir à vacina do sarampo efeito colateral

Polymerase chain reaction detection of adenovirus DNA sequences in human lymphocytes

Seqüências de DNA de adenovirus são freqüentemente encontradas em linfócitos humanos, tendo sido utilizadas para tal as técnicas de PCR e "Southern blot". Isto é possível apesar dessas células não serem permissivas à replicação de adenovírus, sugerindo persistência do genoma viral. Para investigar esse fenômeno, procuramos detectar em voluntários não sintomáticos DNA adenoviral e expressão do gene E1A. Amostras de DNA obtidas de glóbulos brancos periféricos de 51 voluntários, foram submetidas à PCR utilizando oligonucleotídeos para uma seqüência conservada do gene hexon, seguindo-se uma "nested PCR". Seqüências de adenovirus foram encontradas em 27 amostras (52,9 per center). Depois de mais de um ano, novas amostras desses voluntários positivos foram analisadas e em 70,8 per center dos casos o resultado foi mantido. Como isto poderia ser devido à persistência, decidimos verificar se o gene precoce E1A estava relacionado analisando sua expressão através de RT-PCR. Os resultados foram negativos para todas as amostras. O par de oligonucleotídeos desenvolvido para essa finalidade, que tem como alvo uma região conservada em E1A, permitiu detectar seqüências de adenovírus diretamente por PCR. A concordância encontrada entre essa análise e a pesquisa para o gene hexon foi de 84 per center. Nossos dados sugerem alta ocorrência e persistência de genoma adenoviral em linfócitos humanos, e indicam que uma região distinta de E1A é responsável pela persistência. Podemos também afirmar que a PCR para o gene E1A é uma boa opção quando se quer detectar adenovírus, evitando-se o alto risco de contaminação da "nested PCR" necessária para identificar a presença do gene hexon.

Clinical patterns and seasonal trends in respiratory syncytial virus hospitalizations in Säo Paulo, Brazil

The respiratory viruses are recognized as the most frequent lower respiratory tract pathogens for infants and young children in developed countries but less is known for developing populations....

Detection of rubella virus RNA in serum samples by RT-PCR assay / Detecçäo do RNA do vírus da rúbeola no soro através de RT-PCR

Em geral, a reaçäo de polimerizaçäo em cadeia precedida de retrotranscriçäo (RT-PCR) tem demonstrado ser um método rápido e sensível para detectar o RNA do vírus rubéola em uma variedade de materiais clínicos. A reaçäo de RT-PCR foi utilizada para detectar o vírus no soro e confirmar o teste sorológico em indivíduos infectados com vírus da rubéola. Para este estudo, uma fita simples de RNA viral, extraída do soro, foi usada como fita-molde para para a transcriçäo reversa, seguida da amplificaçäo com dois diferentes pares de olinucleotídeos iniciadores e de uma segunda amplificaçäo com outros pares de oligonucleotídeos. O método do RT-PCR foi utilizado para se examinar amostras de soro de nove pacientes com sorologia confirmada para o vírus da rubéola. Quatro soros testados por RT-PCR tiveram como resultado infecçäo pelo vírus da rubéola. Os soros foram primeiramente analisados utilizando-se de 500µl para a extraçäo de RNA. O vírus da rubéola foi também analisados utilizando-se 500µl para a extraçäo de RNA. O vírus da rubéola foi também analisado utilizando-se volumes menores de soro, e somente uma amostra foi amplificada a partir da extraçäo do RNA viral de 300µl. Neste estudo, a estratégia de se utilizar soro no desenvolvimento do teste RT-PCR sugere ser uma alternativa a mais para o diagnóstico da infecçäo pelo vírus da rubéola